Мясо пептонный бульон для каких микроорганизмов. Простые питательные среды мясопептонный агар

Мясо-пептонный бульон (МПБ). Для приготовления мясо-пептонных сред используют мясной бульон, который получают следующим образом: 500 г мелко изрубленного свежего мяса без костей, жира и сухожилий заливают в эмалированной кастрюле 1 л водопроводной воды, нагретой до 50°С, и оставляют настаиваться 12 ч при комнатной температуре или 1 ч при 50-55°С. Мясо отжимают, экстракт процеживают через марлю со слоем ваты, кипятят 30 мин для свертывания коллоидных белков и фильтруют дважды (первый раз через марлю с ватой, второй - через бумажный фильтр). Фильтрат доливают водой до 1 л, разливают в колбы, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120°С 20 мин (пробки колб закрывают сверху колпачками из бумаги). Ватные пробки должны быть плотными, так как они служат фильтром, препятствующим проникновению бактерий из воздуха после стерилизации.

Мясной бульон может быть использован в любое время для приготовления соответствующих сред. Если их готовят сразу, то предварительная стерилизация мясного бульона не требуется.

Нередко в лабораторных условиях мясной настой кипятят вместе с мясом, затем мясо отжимают. При этом бульон получается хорошего качества. При потребности в мясном бульоне особо высокой питательности во время настаивания мяса с водой добавляют немного пепсина и подкисляют бульон соляной кислотой. Пепсин способствует дополнительной гидролизации белковых соединений мяса, и в результате количество доступных бактериям питательных веществ возрастает. Мясо можно заменить мясным экстрактом (5 г на 1 л среды).

Для приготовления МПБ к 1 л мясного бульона добавляют 5-10 г пептона (первый продукт гидролиза белка) для повышения калорийности среды и 5 г поваренной соли для создания осмотической активности. Среду нагревают до растворения пептона, постоянно помешивая.

Затем устанавливают нейтральную или слабощелочную реакцию среды, приливая 20%-ный раствор Na 2 CO 3 до посинения влажной красной лакмусовой бумажки. Дли проверки рН среды удобно использовать индикатор бромтимолблау: 1-2 капли его смешивают в фарфоровой чашке с каплей бульона. В нейтральной среде бромтимолблау - бутылочно-зеленый, в кислой - желтый, в щелочной - синий.

После установления рН среду снова кипятят 5-10 мин, и белки, свернувшиеся при изменении реакции среды, отфильтровывают через бумажный фильтр без осветления бульона или осветлив его белком. Для этого свежий яичный белок взбивают с двойным по объему количеством воды и смешивают с охлажденным до 50 °С бульоном. Смесь кипятят, помешивая, на слабом огне 10 мин, затем фильтруют. Прозрачный мясо-пептонный бульон разливают в пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120 °С 20 мин.

Мясо-пептонный агар (МПА). К 1 л МПБ добавляют 15- 20 г агара. Среду нагревают до растворения агара (температура его плавления - 100 °С, затвердевания - 40 °С), устанавливают слабощелочную реакцию среды 20%-ным раствором Na 2 CO 3 и через воронку разливают в пробирки (приблизительно по 10 мл агара столбиком для последующего разлива по чашкам Петри и по 5 мл для получения скошенного агара - косяков).

При разливе агара необходимо следить за тем, чтобы края пробирок оставались сухими, иначе пробки прилипнут к стеклу. Пробирки со средой стерилизуют в автоклаве при 120 °С 20 мин.

Мясо-пептонная желатина (МПЖ). В 1 л МПБ помешают 100-150 г желатины. Температура плавления желатины зависит от ее содержания в среде: в случае 10%-ной концентрации в среде она плавится при 24 °С; в случае 15%-ной - при 25 °С. В летнее время среды готовят, добавляя 15% желатины.

После растворения желатины при осторожном нагревании устанавливают слабощелочную реакцию среды (как для МПБ и МПА), кипятят 5 мин, затем охлаждают до 40-50 °С. Взбитый, с небольшим количеством воды яичный белок вливают в охлажденную желатиновую среду, хорошо взбалтывают и снова нагревают. Среда после выпадения белков в осадок становится прозрачной. Ее фильтруют в горячем виде через бумажный фильтр, разливают в пробирки и стерилизуют в кипятильнике Коха текучим паром, прогревая среду 3 раза по 30 мин каждые 24 ч.

Картофельный агар. Нарезают ломтиками 200 г очищенного и промытого водой картофеля, заливают 1 л водопроводной воды, варят 30 мин. Отвар фильтруют через вату и добавляют воду до первоначального объема. К полученной жидкости прибавляют 2% агара, кипятят до его расплавления и устанавливают нейтральную реакцию среды (рН = 7). Среду стерилизуют 20 мин при 1 атм 1 .

Пивное сусло и сусло-агар. Зерна ячменя замачивают в холодной воде и проращивают при 35 °С. После того как ростки станут вдвое длиннее зерен, последние высушивают до воздушно-сухого состояния (можно при слабом подогревании), получая солод. Для приготовления сусла солод крупно размалывают и смешивают с водой (250 г солода на 1 л воды). Для лучшего выделения фермента амилазы смесь подогревают при 57 °С до исчезновения реакции на крахмал (синего окрашивания с иодом). Пробы на осахаривание крахмала проводят в фарфоровой чашке в капле жидкости.

Сусло процеживают через вату, затем фильтруют через бумажный фильтр. Такое сусло содержит 10-20% сахара. Точное его содержание определяют по плотности раствора при помощи сахариметра. Сусло разбавляют водой до концентрации сахара 6-8% и стерилизуют 30 мин при 115 °С и давлении 0,5 атм. Готовое сусло можно получить на пивоваренном заводе.

Для приготовления сусло-агара к пивному суслу добавляют 2,5-3% агара, кипятят до расплавления, фильтруют через вату и стерилизуют при тех же условиях, как и пивное сусло.

Обезжиренное молоко. Для приготовления питательных сред используют снятое молоко, так называемый обрат, так как жир в молоке неблагоприятно влияет на рост некоторых микроорганизмов. Обрат получают сепарированием молока, нагретого до 34 °С. Можно удалять жир и при отстаивании молока.

При стерилизации следует помнить о том, что молоко нельзя длительное время выдерживать в автоклаве, так как лактоза (молочный сахар), содержащаяся в молоке, может карамелизоваться.

Обезжиренное молоко разливают в стерильные пробирки и выдерживают при 115 °С (давление 0,5 атм) 10 мин. Перед стерилизацией кислотность обрата не должна превышать 22° Тернера, иначе молоко свернется. После стерилизации его выдерживают 3 сут в термостате при 30°С. чтобы спровоцировать развитие спорообразующих и других стойких к нагреванию форм. Через 3 сут пробирки с молоком просматривают и те, в которых развились микроорганизмы, выбраковывают.

При стерилизации в автоклаве иногда возможно побурение молока вследствие карамелизации молочного сахара и пептонизании казеина. При длительной стерилизации на дно пробирки выпадает осадок казеина, который может частично пептонизироваться. Перегретoe побуревшее молоко в качестве среды использовать нельзя.

Дрожжевые среды. Дрожжевая вода. 50-100 г сухих дрожжей разводят в 1 л воды, кипятят 10 мин, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют текучим паром по 30 мин в течение 3 дней ежедневно.

Дрожжевой автолизат. 200 г прессованных дрожжей разводят в 1 л воды; добавляют 2 г Na 2 HPO 4 , каплями I н. раствор NaOH (до рH 6,1) и 5 мл хлороформа, выдерживают при 37 °С 2 сут, доводят раствором NaOH до рН 7,4, кипятят 30 мин. фильтруют через бумажный фильтр, разливают в посуду и стерилизуют при 115 °С 30 мин.

Дрожжевой экстракт. 1 кг прессованных дрожжей разводят в 1 л воды, смесь кипятят 1 ч, трижды отфильтровывают через бумажный фильтр и стерилизуют при 115 °С 30 мин.

Бобовый отвар. 50 г фасоли (лучше белой) заливают 1 л водопроводной воды и варят до готовности так, чтобы бобы не разварились. Полученный отвар фильтруют через вату, добавляют к нему 10 г сахара и доводят до первоначального объема. Устанавливают слабощелочную реакцию среды, разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве 30 мин при давлении пара 1,5 атм.

1 По системе СИ давление принято выражать в паскалях (Па): 1 атм = 1,01325 х 10 5 Па = 0,1 МПа.

Мясопептонный бульон мясопептонный бульон

(Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.)

Мясопептонный бульон

(МПБ) - основная жидкая питательная среда, используемая для выращивания хемоорганотрофных бактерий. Готовят на основе мясной воды или 0,5 - 1% водного р-ра мясного экстракта, добавляя к ним 0,5-1% пептона и 0,5% натрия хлорида. Устанавливают рН 7,4 -7,6. Стерилизуют автоклавированием при 120°С в течение 15- 30 мин. См. Питательные среды бактериологические .

(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)

Смотреть что такое "мясопептонный бульон" в других словарях:

- (МПБ) жидкая питательная среда для культивирования микроорганизмов, состоящая из мясной воды и пептона (1 2%); служит основой многих других жидких питательных сред … Большой медицинский словарь

Мясной отвар, питательная среда, применяемая для культивирования микроорганизмов, участвующих в деградации белков. В зависимости от добавок различают, напр., глицериновый Б., нитратный Б., лактозный Б., наибольшее распространение имеет… … Словарь микробиологии

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ - ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, искусственные среды того или иного состава, предназначенные для культивирования микробов и простейших в лабораторных условиях. Впервые были введены для изолирования отдельных видов бактерий Р. Кохом в 1881 году, что создало… … Большая медицинская энциклопедия

Субстраты, состоящие из компонентов, обеспечивающих необходимые условия для культивирования микроорганизмов или накопления продуктов их жизнедеятельности. Питательные среды различаются по назначению, консистенции и составу. По назначению их… … Медицинская энциклопедия

Питательная среда вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред. Содержание 1 Требования, предъявляемые к средам 2 Классификация … Википедия

Под именем бактерий в науке известны мельчайшие, микроскопической величины организмы, принадлежащие к растительному царству. По своей организации, по своим морфологическим особенностям, Б. ближе всего стоят к так называемым циановым или… … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона

Аг антиген АЕ антитоксическая или антигенная единица антибактер. антибактериальный Ат антитело АТФ аденозинтрифосфорная кислота бактер. бактериальный бактериол бактериологический бактериоскоп. бактериоскопический БАС бактерицидная активность… … Словарь микробиологии

Для выделения, культивирования и идентификации микроорганизмов в лабораторных условиях используют различные искусственные питательные среды, которые в зависимости от назначения подразделяют на группы:

-обычные, или простые, - для выращивания большинства аэробов и факультативных анаэробов;

-специальные - для культивирования микробов, которые не растут или дают слабый рост на простых питательных средах;

-селективные - для выделения культур одною рода или вида, имеющих преимущество в размножении перед другими представителями микрофлоры;

-дифференциально-диагностические предназначенные для выявления культурально-биохимических особенностей бактерий,

-среды накопления (обогащения) - употребляемые для увеличения численности микробов, наличие которых в исследуемом материале незначительно, при подавлении роста посторонней микрофлоры.

Основой большинства питательных сред животного происхождения является мясная вода, для некоторых - печеночная вода.

Мясная вода. Свежую нежирную говядину или конину освобождают от костей, жира и сухожилий, пропускают через мясорубку или нарезают мелкими кусочками, заливают дистиллированной (водопроводной) водой в соотношении 1: 2 (на 500 г мяса 1000 см3 воды) и выдерживают 15 - 18 ч в прохладном месте. Затем настой кипятят в течение 40 мин - 1 ч и снимают накипь. После кипения мясную воду остужают для застывания жира, который легко при этом удаляется, фильтруют через ватно-марлевый фильтр до полной прозрачности, затем доливают дистиллированной (водопроводной) водой до первоначального объема, разливают в бутыли и стерилизуют в течение 20 мин при температуре 120 °С и давлении;

Печеночная вода. Свежую говяжью печень, освобожденную от жира пленок, Измельчают на мясорубке и заливают водопроводной водой из расчета 1: 2, настаивают в течение 1 ч и кипятят 30 мин при постоянно помешивании. После отстаивания фарш удаляют, доводят до первоначального объема дистиллированной водой и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Разлитую по колбам печеночную воду стерилизуют 30-40 мин при температуре 112 °С и давлении 0,05 МПа.

Основной раствор (перевар) Хоттингера. 1000 г мяса (говядины или конины), освобожденного от жира и сухожилий, нарезают кусками по 1-2 см, которые опускают небольшими порциями в кастрюлю с 2000 см3 кипящей водопроводной воды. Кипятят в течение 15-20 минут до свертывания белков (цвет мяса станет серым). Мясо вынимают шумовкой и пропускают через мясорубку, а оставшуюся жидкость фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают pH 8,0. Затем фильтрат соединяют с фаршем, охлаждают до температуры 40 °С в открытой кастрюле и добавляют дважды измельченную поджелудочную железу, предварительно очищенную от жира, соединительной ткани, в количестве 10% к полученной взвеси (на 1000 см3 жидкости 100 г железы) или 0,9 -1,0 % сухого панкреатина (в зависимости от его активности).

Полученную смесь хорошо размешивают, после чего снова подщелачивают 10%-ным раствором гидроксида натрия или питьевой содой до pH 7,8-8,0. Смесь переливают в бутыли с хорошо подобранной резиновой пробкой на 2/3 их объема и добавляют на каждый литр смеси 10 см3 х. ч. хлороформа; закрывают бутыль пробкой и несколько раз встряхивают, после чего, открыв пробку, удаляют пары хлороформа, а бутыль снова закрывают.

Через 1-2 ч после добавления поджелудочной железы или панкреатина проверяют реакцию, устанавливают pH 7,4-7,6 и оставляют смесь для переваривания на 7 -16 сут при комнатной температуре до образования осадка. Первые 3-4 сут переваривания ежедневно встряхивают жидкость не менее трех раз в сутки, в дальнейшем встряхивать можно реже. За 1- 2 сут до окончания переваривания встряхивание прекращают, чтобы гидролизат отстоялся.

Можно ферментативное переваривание проводить в термостате при температуре 40-42 °С в течение 2 сут. Содержимое бутыли взбалтывают 2-3 раза в сутки с открыванием пробки. Конец переваривания характеризуется следующими признаками: жидкость над осадком просветляется и принимает соломенно-желтый цвет. Готовый перевар фильтруют через полотняный или бумажный фильтр, сливают в бутыль и стерилизуют в течение 30 мин при температуре 120 °С. Приготовленный гидролизат можно хранить пять месяцев. Перед употреблением жидкость вновь фильтруют.

Химические показатели готового перевара Хоттингера должны быть следующими: общего азота 900-1200 мг%, амииного азота 600- 750 мг%, триптофана 200-300 мг%

(Свободный триптофан можно обнаружить в качественной реакции, происходящей в кислой среде при взаимодействии его с препаратами хлора; с этой целью к 5 куб. см. питательной среды добавляют 2 капли уксусной кислоты, тщательно перемешивают и вносят несколько капель1%-го водного раствора хлорамина - появление розовой окраски свидетельствует о наличии триптофана.).

Пептонная вода. К 1000 см3 дистиллированной воды добавляют 10-20 г пептона и 5 г хлорида натрия, кипятят 30 мин до растворения пептона, устанавливают pH 7,2-7,4, фильтруют через бумажный фильтр до полной прозрачности, после чего стерилизуют 30 мин при давлении 0,1 МПа и температуре 120 °С.

Пептонная вода может быть использована взамен мясо-пептонного бульона.

Мясо-пептонный бульон (МПБ) . К 1000 см3 мясной воды добавляют 10 г сухого пептона и 5 г хлорида натрия, кипятят в течение 30 мин, устанавливают необходимую реакцию, после чего добавляют воду до первоначального объема. Бульон фильтруют через бумажный фильтр, окончательно устанавливают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (питьевой соды) или 10 %-ным раствором гидроксида натрия требуемую реакцию, стерилизуют 15 -20 мин при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа.

Мясо-пептонный бульон предназначен для культивирования аэробных микроорганизмов и изучения показателей роста в жидкой питательной среде по помутнению среды, наличию и характеристике осадка, образованию пристеночного кольца, пленки.

Мясо-пептонный агар (МПА). К 1000 куб.см. мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного его растворения.

Мясо-пептонный агар, охлажденный до температуры 50-55 °С, осветляют яичным белком (из расчета один белок на 1000 см3 мясо-пептонного агара), помещают в автоклав, не завинчивая крышку автоклава, или в кипящую водяную баню, чтобы белок свернулся. Горячий мясо-пептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают в нем pH 7,2-7,4, разливают в колбы или пробирки и 20 мин стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С.

Мясо-пептонный агар предназначен для культивирования аэробов и изучения характера роста микробов по величине и форме колоний, линии края, цвету, блеску, прозрачности, консистенции и некоторым другим признакам.

Полужидкий агар (ПЖА). К 1000 куб.см. мясо-пептонного бульона добавляют 3-4 г агара и на слабом огне расплавляют при постоянном помешивании, фильтруют через тканевый фильтр до полной прозрачности, разливают в пробирки по 5 см3 и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30 мин.

Готовый полужидкий агар охлаждают столбиком, среда должна быть совершенно прозрачной.

Полужидкий агар используют для определения подвижности микроорганизмов. С этой целью посев тест-культур проводят уколом в столбик среды, не прокалывая до дна 5-6 мм: подвижные культуры дают диффузный рост и вызывают помутнение всей питательной среды, неподвижные - растут по уколу, среда остается прозрачной, штаммы, обладающие слабой подвижностью, дают помутнение отдельных участков агара обычно вблизи укола.

Питательный желатин (МПЖ). К 1000 см3 мясо-пептонного бульона прибавляют 100 г пищевого желатина высшего сорта. После набухания желатина в течение 1-2 ч растворяют при медленном нагревании на водяной бане при температуре 40 - 50 °С до полного расплавления. Устанавливают pH 7,2 10 %-ным раствором бикарбоната натрия, фильтруют через бумажный фильтр в горячем виде. Если среда мутная, ее осветляют белком куриных яиц, после чего в горячем виде фильтруют через ватно-марлевый фильтр и разливают в пробирки по 7 -8 см3, стерилизуют дробно 3 дня по 30 мин или однократно при температуре 110 °С и давлении 0,04 МПа в течение 30 мин. После стерилизации среду охлаждают столбиком.

Среда предназначена для определения протеолитической активности микробов по разжижению желатина. Являясь растворимым белком, полученным из нерастворимого коллагена, под влиянием фермента желатиназы подвергается гидролизу и теряет свои желирующие свойства, в результате при низких температурах остается жидким.

Бульон Хот ти нгера. К 1000 см3 основного раствора добавляют 500 см3 водопроводной или дистиллированной воды, 3 г хлорида натрия и 0,12 г двузамещенного фосфата калия. Полученный раствор кипятят в течение 15-20 мин, устанавливают pH 7,2-7,4 и фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, затем разливают в колбы или пробирки и стерилизуют в течение 20-30 мин при температуре 120°С и давлении 0,1 МПа.

В бульоне Хоттингера изучают характер роста микроорганизмов в жидкой питательной среде.

Среда Мартена. Свежие свиные желудки освобождают от жира и содержимого и пропускают через мясорубку. На 250 г фарша добавляют 1000 см3 теплой (50 °С) кипяченой водопроводной воды и 10 см3 концентрированной соляной кислоты. Смесь выдерживают при температуре 45-50 °С в течение 24 ч, периодически взбалтывая, затем прогревают текучим паром 30 мин и оставляют в холодном месте на 5 сут. Надосадочную жидкость сливают, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы и стерилизуют при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30 мин. Полученный пептон Мартена хранят до 3 мес.

Из мяса крупного рогатого скота, освобожденного от жира и сухожилий, готовят фарш. К 500 г фарша добавляют 1000 см3 дистиллированной воды. Полученную смесь выдерживают при 4-8 °С в течение 24 ч, после чего кипятят на слабом огне 2 ч, постоянно подливая воду до первоначального объема. Фарш отжимают и удаляют, мясную воду фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы и стерилизуют при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30-40 мин. Готовую среду хранят при температуре 4-8 °С до 3 мес.

Для приготовления жидкой среды смешивают равные объемы пептона Мартена и мясной воды, устанавливают pH 8,0-8,2, разливают в колбы и стерилизуют при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30 мин. Бульон хранят не более одного месяца.

Агар Мартена. В среду Мартена (бульон Мартена), подогретый до 50-60 °С, добавляют мелко нарезанный промытый агар-агар из расчета 25 г на 1000 см3, периодически помешивая, доводят жидкость до кипения для полного растворения агара. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр в горячем виде, разливают по колбам и стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 30 мин.

Бульон и агар Мартена предназначены для культивирования анаэробов и микоплазм.

• Питательные среды. Ч.2. Селективные дифференциально-диагностические среды для первичной идентификации энтеробактерий.

Простые питательные среды Мясо-пептонный бульон (МПБ) является белковой основой всех сред. Готовят на мясной воде с добавлением готового пептона. Пептон – продукт неполного переваривания (гидролиза) белка, используется как источник азота и углерода. Мясо-пептонный агар (МПА) – получают путём добавления к МПБ 1, 5 – 3% a г ap — a г apa. Агар-агар – продукт из морских водорослей, содержит высокомолекулярные полисахариды

Селективные питательные среды стимулируют рост одних микробов и угнетают рост других (за счет добавления в среду определённых компонентов). Так как в этих средах патогенные бактерии размножаются и накапливаются, их называют также средами обогащения. Например, среда Мюллера служит для накопления сальмонелл. К питательной среде добавляют мел, раствор Люголя и гипосульфит натрия. При взаимодействии этих веществ образуется тетратионат натрия, который угнетает рост кишечных палочек, но создает благоприятные условия для размножения сальмонелл.

Дифференциально-диагностич еские среды позволяют отличить один вид микроба от другого на основании разной биохимической активности бактерий. В состав дифференциально-диагностических сред входят: — основная питательная среда, обеспечивающая размножение бактерий, — определенный химический субстрат, различное отношение к которому является диагностическим признаком, — индикатор, изменение цвета которого свидетельствует о расщеплении субстрата и образовании конечных продуктов.

Среда Эндо Состав: питательный агар, лактоза, основной фуксин. Среда имеет розовый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в темно-красный цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.

Среда Левина Состав: питательный агар, лактоза, эозин и метиленовый синий. Среда имеет коричневатый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в темно-синий цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.

Среда Плоскирева Состав: питательный агар, лактоза, нейтральный красный, соли желчных кислот, бриллиантовый зелёный. Среда имеет розовато-желтоватый оттенок. Колонии бактерий, ферментирующих лактозу, окрашиваются в бруснично-красный цвет; колонии бактерий, не ферментирующих лактозу, остаются бесцветными.

Техника посевов Метод Дригальского: Каплю исследуемого материала вносят в первую чашку Петри и стерильным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) делают такой же посев во второй и третьей чашках. С каждым посевом бактерий на шпателе остается все меньше и, при посеве на третью чашку, бактерии будут распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от друга и будут образовываться изолированные колонии. Посев петлёй параллельными штрихами

Посев петлёй параллельными штрихами Колония - это видимое изолированное скопление представителей одного вида микроорганизмов, образующееся при размножении одной бактериальной клетки на плотной питательной среде. Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по культуральным признакам.

К 1000 мл мясопептонного бульона перед стерилизацией добавляют 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения.

Мясопептонный агар, охлажденный до температуры 50- - 55° С, осветляют яичным белком (из расчета один белок на 1000 мл мясопептонного агара), по­мешают в автоклав, не завинчивая крышку автоклава, или в аппарат Коха на 1 ч чтобы белок свернулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горя­чий Мясопептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавли­вают в нем рН 7,0-7,4, разливают во флаконы или пробирки и 20 мин стерили­зуют в автоклаве при температуре 120° С.

Мясопептонный желатин

К мясопептонному бульону прибавляют мелко нарезанный желатин из расче­та ю-15 г на 100 мл. После набухания желатин растворяют при медленном нагревании в водяной бане при температуре 40-45 °С, устанавливают рН=7,0 10%-ным раствором бикарбоната натрия, фильтруют через бумажный фильтр в горячем виде. Среду разливают в пробирки по 5-8 мл, стерилизуют дробно 3 дня по часу при температуре 100° С или однократно при 110° С в течение 20 мин. После стерилизации среду охлаждают.

Пептонная вода

К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 5 г хлористого натрия, кипятят до растворения пептона, фильтруют и устанавливают рН 7,2- 7,4, после чего стерилизуют 30 мин при температуре 120° С.

Элективные среды для выявления возбудителей пищевых то кс и ко инфекций Среды фуксин - сульфитный агар (среда Эндо), бакто-агар Плоскирева, ме-тилен-эозиновая среда Левина, висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера) го­товят из сухих стандартных сред по прописи, указанной на этикетке.

Среда Смирнова

К 1 л расплавленного МП А добавить 10-12 г лактозы и 4-5 мл 1,2% рас­твора бромкрезолпурпур. Стерилизовать дробно (или при 0,5 атм 20 мин).

Среды накопления сальмонелл Среда Мюллера Для приготовления среды Мюллера готовят вначале растворы серноватисто-кислого натрия и Люголя.

В мерный цилиндр с 50 г серноватистокислого натрия добавляют до 100 мл Дистиллированной воды. Раствор переливают в бутыль и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

Для приготовления среды Мюллера в стерильные флаконы помещают по 4,5 г мела и стерилизуют их сухим паром в течение 1 ч. Затем наливают в каждый флакон по 90 мл бульона из перевара Хоттингера, содержащего 130- 150 мг % азота, устанавливают рН 7,2-7,4 и стерилизуют 30 мин при температуре

120°С После стерилизации вновь устанавливают рН 7,2-7,4, для чего прове­ряют в одном из флаконов и определяют необходимый для подтитровки дан­ного количества среды объем соляной кислоты или гидрата окиси натрия. Затем в асептических условиях перед употреблением добавляют по 2 мл раствора Лю-голя и по 10 мл раствора серноватистокислого натрия.

Таблица 1 Рост возбудителей пищевых токсикоинфекций на элективных средах и МПА

Название	Среда до	Кишечная	Сальмонелла
		Мелкие колонии	Мелкие колонии	Сплошной
	Розового	красного цвета с	цвета среды, цвет	рост, цвет
		металлическим	среды не меняет-	среды не
		оттенком, среда		меняется
		вокруг краснеет
Смирнова	фиолетово-	Мелкие колонии	Мелкие колонии	Сплошной
	го цвета	желтого цвета,	цвета среды, с	рост, цвет
		среда вокруг	голубым оттен-	среды не
			ком, цвет среды не меняется	меняется
	Коричнево-	Мелкие колонии	Мелкие колонии	Сплошной
	го цвета	темно-бурого	цвета среды, с	рост, цвет
		цвета, цвет сре-	сиреневым от-	среды не
		ды не меняется	тенком, цвет сре­ды не меняется	меняется
Плоскире-	Кирпично-	Мелкие колонии	Мелкие колонии	Отдельные
	красного	красного цвета,	цвета среды, сре-
		цвет среды не меняется	да вокруг немно­го просветляется	цвета среды
	Соломенно-	Мелкие колонии	Мелкие колонии	Сплошной
		серого цвета	серого цвета с	рост, цвет
			голубоватым от­тенком	среды не меняется